目前常用的去除高豐度蛋白的方法有三種:物理化學(xué)法:通過高速離心、色譜分離等方式去除高豐度蛋白;高豐度蛋白去除試劑盒:通過特異性結(jié)合去除高豐度蛋白,使樣品復(fù)雜性顯著降低,從而檢測到更多低豐度蛋白。中低豐度蛋白富集試劑盒:這個方法的思路和第二種正好相反,通過特異性富集中低豐度蛋白,達到更好的檢測中低豐度蛋白的目的。


去除高豐度蛋白的方法有哪些?
什么時候需要去除高豐度蛋白?不去除有什么影響?
一般來說體液樣本如尿液,血液,乳汁等都會存在高豐度蛋白。高豐度蛋白在樣本中占據(jù)了大部分的蛋白質(zhì)總量,它們的存在會一定程度上干擾低豐度蛋白的檢測信號,增加數(shù)據(jù)的復(fù)雜性,降低樣本的分辨率從而影響檢測效果。
蛋白組如何選擇數(shù)據(jù)庫?
UniProt>NCBI>其他 ,UniProt是目前世界上最大最完整的蛋白數(shù)據(jù)庫。其中除了人和小鼠可以用Swiss-Prot更好以外,其他物種都推薦UniProt Proteomes。UniProt的信息大多數(shù)都是經(jīng)過驗證或人工校驗的,冗余度非常低。
NCBI是由美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)維護的一個包含各種物種蛋白質(zhì)序列的大型數(shù)據(jù)庫,蛋白庫的信息是任何一個研究者都可隨意提交的,因此NCBI中收錄的蛋白質(zhì)信息非常豐富。但是很多蛋白的信息是沒有經(jīng)過驗證或人工校驗就直接提交的,所以會有很多冗余的蛋白信息。
不同批次的蛋白組可以一起分析嗎?
不可以。因為質(zhì)譜的批次效應(yīng)比較大,兩個檢測時間點儀器的響應(yīng)會發(fā)生變化,這樣可能導(dǎo)致的一些含量低的物質(zhì)可能只在一個批次里被檢出。并且由于儀器的波動會導(dǎo)致物質(zhì)的峰面積整體發(fā)生變化,從而影響結(jié)果的一致性和準確性。
作為調(diào)控產(chǎn)物的蛋白質(zhì)又是如何成為機制調(diào)控的起因的?
轉(zhuǎn)錄因子,是一類具有能夠結(jié)合到DNA特定序列上影響基因的轉(zhuǎn)錄過程的蛋白質(zhì)。它對于理解基因表達調(diào)控、信號傳導(dǎo)途徑、細胞分化和發(fā)育,以及疾病的發(fā)生和發(fā)展具有重要意義。一般情況下,可以利用JASPER、AnimalTFDB、PlantTFDB等數(shù)據(jù)庫獲取轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的motif信息,再利用MEME FIMO等軟件預(yù)測轉(zhuǎn)錄靶向基因。