服務簡介
基因克隆技術可概括為∶分、切、連、轉、選。最終目的在于通過相應技術手段，將目的基因導入寄主細胞，在宿主細胞內目的基因被大量的復制。一般來說，基因克隆技術包括把來自不同生物的基因同有自主復制能力的載體DNA在體外人工連接，構建成新的重組DNA，然后送入受體生物中去表達，從而產生遺傳物質和狀態的轉移和重新組合。因此基因克隆技術又稱為分子克隆、基因的無性繁殖、基因操作、重組DNA技術以及基因工程等。
載體是整個基因工程的基石，是DNA重組技術的核心要素。為了滿足研究的需要，我們需要按照自己的意愿有目的的去構建和改造載體，最終實現擴增目標片段或者特定蛋白表達等目的。雖然載體構建是分子生物學研究中最常用的技術之一，但由于構建目的的多樣性，加之實際操作中影響因素較多，對研究者經驗要求較高，因而往往費時費力。
我公司提供專業優質的過表達載體、RNAi載體、CRISPR/Cas9敲除載體構建技術服務，目標對象包括動物（人源細胞、鼠源細胞等）、植物（甘薯、木薯、馬鈴薯、楊樹等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。公司擁有專業的儀器設備和技術人員支持，周期短，效果好，質量優，價格低。
技術路線
方案設計
目的基因克隆
構建
測序驗證
報告出具
技術優勢
高效，構建周期短，可快速交付；
穩定優質，經驗豐富的分子生物學專家將完全貼合您的需求進行方案設計；
服務周到，提供售前咨詢、售后技術支持；
樣本要求
1、實驗材料與相關資料
普通載體構建改造：載體、PCR或者酶切產物、載體圖譜、載體來源信息與基因背景資料；
表達載體、報告基因載體、病毒載體：載體、含目的基因的質粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標蛋白基因序列與酶切位點信息。
請確認待改造的載體序列正確，與提供的圖譜等信息匹配，構建完成后如需測序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
如果您只提供組織或細胞樣本，請提供所需克隆基因的NCBI登錄號或電子版全序列，本公司將額外收取RNA提取及逆轉錄的費用；
對于本公司已有的載體和模板，我們可以免費提供；
由于生物實驗的不確定性，對于結果為陰性的項目，公司將正常收取部分物料費用。
2、RNAi干擾載體構建
RNA干擾(RNA interference, RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA，dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。
我公司提供專業優質的RNAi載體構建技術服務，目標對象包括動物（人源細胞、鼠源細胞等）、植物（擬南芥、水稻、小麥、玉米等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。公司擁有專業的儀器設備和技術人員支持，周期短，效果好，質量優，價格低。
服務內容
服務說明
? 客戶需提供載體、含目的基因的質粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標蛋白基因序列與酶切位點信息。
? 請確認待實驗的載體、目的基因片段序列正確，與提供的圖譜等信息匹配,構建完成后如需測序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
? 如果您只提供組織或細胞樣本，請提供所需克隆基因的NCBI登錄號或電子版全序列，并額外收取RNA提取及逆轉錄的費用；
? RNA干擾載體的構建分為兩個部分，第一部分主要是在中間載體上構建RNAi的發卡結構，第二部分主要是把中間載體上的發卡結構轉移到表達載體上。
3、PET表達載體構建
PET系統是有史以來在 E.coli中克隆表達重組蛋白的功能最強大的系統。目的基因被克隆到 PET質粒載體上，受噬菌體 T7強轉錄及翻譯(可選擇)信號控制；表達由宿主細胞提供的T7 RNA聚合酶誘導。T7 RNA 聚合酶機制十分有效并具選擇性：充分誘導時，幾乎所有的細胞資源都用于表達目的蛋白；誘導表達后僅幾個小時，目的蛋白通常可以占到細胞總蛋白的50%以上。
我公司提供專業優質的PET表達載體構建技術服務，目標對象包括動物（人源細胞、鼠源細胞等）、植物（擬南芥、水稻、小麥、玉米等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。公司擁有專業的儀器設備和技術人員支持，周期短，效果好，質量優，價格低。
服務內容
服務說明
? 客戶需提供載體、含目的基因的質粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標蛋白基因序列與酶切位點信息。
?請確認待實驗的載體、目的基因片段序列正確，與提供的圖譜等信息匹配，構建完成后如需測序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
? 如果您只提供組織或細胞樣本，請提供所需克隆基因的NCBI登錄號或電子版全序列，并額外收取RNA提取及逆轉錄的費用；
? 對于本公司已有的載體和模板，我們可以免費提供。
4、Gateway表達載體構建
Gateway技術是基于lambda噬菌體的位點特異性重組反應，在目的片段兩端添加重組位點，將PCR產物與含重組位點的目的載體混合重組反應便可直接轉化篩選重組克隆，與經典克隆多個步驟相比，該方法只需一步生化反應便能達到目的，是高通量克隆基因的好方法。Gateway技術提供以下可能： 通過去除冗長的亞克隆步驟節省您的時間，同時將您的基因轉移到多個表達系統 在任何您選擇的系統――體外，細菌，酵母，昆蟲，或哺乳動物――分析表達。
我公司提供專業優質的Gateway載體構建技術服務，目標對象包括動物（人源細胞、鼠源細胞等）、植物（擬南芥、水稻、小麥、玉米等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。公司擁有專業的儀器設備和技術人員支持，周期短，效果好，質量優，價格低。
服務內容
服務說明
? 客戶需提供載體、含目的基因的質粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標蛋白基因序列與酶切位點信息。
? 請確認待實驗的載體、目的基因片段序列正確，與提供的圖譜等信息匹配，構建完成后如需測序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
? 如果您只提供組織或細胞樣本，請提供所需克隆基因的NCBI登錄號或電子版全序列，并額外收取RNA提取及逆轉錄的費用；
? 對于本公司已有的載體和模板，我們可以免費提供。
5、Crispr/cas9載體構建
CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) /Cas (CRISPR-associated) 是最近幾年出現的一種由RNA指導Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術。它是細菌和古細菌為應對病毒和質粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。
此系統的工作原理是crRNA (CRISPR-derived RNA) 通過堿基配對與 tracrRNA (trans-activating RNA) 結合形成 tracrRNA/crRNA 復合物，此復合物引導核酸酶 Cas9 蛋白在與 crRNA 配對的序列靶位點處剪切雙鏈 DNA，從而實現對基因組DNA序列進行編輯；而通過人工設計這兩種 RNA，可以改造形成具有引導作用的gRNA (guide RNA)，足以引導 Cas9 對 DNA 的定點切割。
作為一種 RNA導向的 dsDNA 結合蛋白，Cas9 效應物核酸酶是已知的第一個統一因子 (unifying factor)，它能夠共定位 RNA、DNA 和蛋白，從而擁有巨大的改造潛力。將蛋白與無核酸酶的 Cas9(Cas9 nuclease-null)融合，并表達適當的 gRNA，即可靶定任何 dsDNA 序列，而 RNA 可連接到gRNA 的末端，不影響 Cas9 的結合。因此，Cas9 能在任何 dsDNA 序列處帶來任何融合蛋白及 RNA，這為生物體的研究和改造帶來巨大潛力。
我公司提供專業優質的crispr/cas9載體構建技術服務，目標對象包括動物（人源細胞、鼠源細胞等）、植物（擬南芥、水稻、小麥、玉米等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。可將基因敲入/敲出細胞系、定點突變，公司擁有專業的儀器設備和技術人員支持，周期短，效果好，質量優，價格低。
技術特色
? 可實現多個基因位點及多個基因同時敲除；
? 最新的Nickase/雙gRNA技術，顯著降低脫靶率；
? 無種屬限制，適用于各種植物的靶向敲除；
服務說明
? 客戶需提供載體、含目的基因的質粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標蛋白基因序列與酶切位點信息。
? 請確認待實驗的載體、目的基因片段序列正確，與提供的圖譜等信息匹配，構建完成后如需測序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
? 如果您只提供組織或細胞樣本，請提供所需克隆基因的NCBI登錄號或電子版全序列，本公司將額外收取RNA提取及逆轉錄的費用；
參考文獻
1）Mojica FJ,Diez-Villase?or CGarcía-Martínez ,et al. 2005 Intervening sequences of regularly spaced prokaryotic repeats derive from foreign genetic elements.Journal ofMolecular Evolution.60(2):174-182.
2）BarrangouR,FremauxC,DeveauH,et al.2007 CRISPR provides acquired resistance against viruses in prokaryotes.Science,2007,315(5819):1709-1712.
3）GarneauJE,Dupuis Mè,Villion M,et al.2010 The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA.Nature.468(7320):67-71.
4）Akashi H,Miyagishi M,Taira K. 2004 RNAi expression vectors in plant cells. Methods Mol Biol. 252:533-43.
5）Crowl R,Seamans C,Lomedico P, et al.1985 Versatile expression vectors for high-level synthesis of cloned gene products in Escherichia coli. Gene. 38(1-3):31-8.