農(nóng)學(xué)服務(wù)
基于高精密儀器量化生命，基于大數(shù)據(jù)分析解析生命。十年技術(shù)沉淀，專業(yè)的設(shè)備和技術(shù)支持，為農(nóng)業(yè)、植物、食品和環(huán)境領(lǐng)域技術(shù)開(kāi)發(fā)、科學(xué)研究提供完整的技術(shù)解決方案和專業(yè)的分析檢測(cè)服務(wù)。創(chuàng)新一站式技術(shù)解決方案，努力成為廣大科研從業(yè)者最專業(yè)的技術(shù)合作伙伴。
服務(wù)簡(jiǎn)介
基因克隆技術(shù)可概括為∶分、切、連、轉(zhuǎn)、選。最終目的在于通過(guò)相應(yīng)技術(shù)手段，將目的基因?qū)爰闹骷?xì)胞，在宿主細(xì)胞內(nèi)目的基因被大量的復(fù)制。一般來(lái)說(shuō)，基因克隆技術(shù)包括把來(lái)自不同生物的基因同有自主復(fù)制能力的載體DNA在體外人工連接，構(gòu)建成新的重組DNA，然后送入受體生物中去表達(dá)，從而產(chǎn)生遺傳物質(zhì)和狀態(tài)的轉(zhuǎn)移和重新組合。因此基因克隆技術(shù)又稱為分子克隆、基因的無(wú)性繁殖、基因操作、重組DNA技術(shù)以及基因工程等。
載體是整個(gè)基因工程的基石，是DNA重組技術(shù)的核心要素。為了滿足研究的需要，我們需要按照自己的意愿有目的的去構(gòu)建和改造載體，最終實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增目標(biāo)片段或者特定蛋白表達(dá)等目的。雖然載體構(gòu)建是分子生物學(xué)研究中最常用的技術(shù)之一，但由于構(gòu)建目的的多樣性，加之實(shí)際操作中影響因素較多，對(duì)研究者經(jīng)驗(yàn)要求較高，因而往往費(fèi)時(shí)費(fèi)力。
我公司提供專業(yè)優(yōu)質(zhì)的過(guò)表達(dá)載體、RNAi載體、CRISPR/Cas9敲除載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)，目標(biāo)對(duì)象包括動(dòng)物（人源細(xì)胞、鼠源細(xì)胞等）、植物（甘薯、木薯、馬鈴薯、楊樹(shù)等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。公司擁有專業(yè)的儀器設(shè)備和技術(shù)人員支持，周期短，效果好，質(zhì)量?jī)?yōu)，價(jià)格低。
技術(shù)路線
方案設(shè)計(jì)
目的基因克隆
構(gòu)建
測(cè)序驗(yàn)證
報(bào)告出具
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
高效，構(gòu)建周期短，可快速交付；
穩(wěn)定優(yōu)質(zhì)，經(jīng)驗(yàn)豐富的分子生物學(xué)專家將完全貼合您的需求進(jìn)行方案設(shè)計(jì)；
服務(wù)周到，提供售前咨詢、售后技術(shù)支持；
樣本要求
1、實(shí)驗(yàn)材料與相關(guān)資料
普通載體構(gòu)建改造：載體、PCR或者酶切產(chǎn)物、載體圖譜、載體來(lái)源信息與基因背景資料；
表達(dá)載體、報(bào)告基因載體、病毒載體：載體、含目的基因的質(zhì)粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標(biāo)蛋白基因序列與酶切位點(diǎn)信息。
請(qǐng)確認(rèn)待改造的載體序列正確，與提供的圖譜等信息匹配，構(gòu)建完成后如需測(cè)序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
如果您只提供組織或細(xì)胞樣本，請(qǐng)?zhí)峁┧杩寺』虻腘CBI登錄號(hào)或電子版全序列，本公司將額外收取RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄的費(fèi)用；
對(duì)于本公司已有的載體和模板，我們可以免費(fèi)提供；
由于生物實(shí)驗(yàn)的不確定性，對(duì)于結(jié)果為陰性的項(xiàng)目，公司將正常收取部分物料費(fèi)用。
2、RNAi干擾載體構(gòu)建
RNA干擾(RNA interference, RNAi)是指在進(jìn)化過(guò)程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA，dsRNA)誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。
我公司提供專業(yè)優(yōu)質(zhì)的RNAi載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)，目標(biāo)對(duì)象包括動(dòng)物（人源細(xì)胞、鼠源細(xì)胞等）、植物（擬南芥、水稻、小麥、玉米等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。公司擁有專業(yè)的儀器設(shè)備和技術(shù)人員支持，周期短，效果好，質(zhì)量?jī)?yōu)，價(jià)格低。
服務(wù)內(nèi)容
服務(wù)說(shuō)明
? 客戶需提供載體、含目的基因的質(zhì)粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標(biāo)蛋白基因序列與酶切位點(diǎn)信息。
? 請(qǐng)確認(rèn)待實(shí)驗(yàn)的載體、目的基因片段序列正確，與提供的圖譜等信息匹配,構(gòu)建完成后如需測(cè)序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
? 如果您只提供組織或細(xì)胞樣本，請(qǐng)?zhí)峁┧杩寺』虻腘CBI登錄號(hào)或電子版全序列，并額外收取RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄的費(fèi)用；
? RNA干擾載體的構(gòu)建分為兩個(gè)部分，第一部分主要是在中間載體上構(gòu)建RNAi的發(fā)卡結(jié)構(gòu)，第二部分主要是把中間載體上的發(fā)卡結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到表達(dá)載體上。
3、PET表達(dá)載體構(gòu)建
PET系統(tǒng)是有史以來(lái)在 E.coli中克隆表達(dá)重組蛋白的功能最強(qiáng)大的系統(tǒng)。目的基因被克隆到 PET質(zhì)粒載體上，受噬菌體 T7強(qiáng)轉(zhuǎn)錄及翻譯(可選擇)信號(hào)控制；表達(dá)由宿主細(xì)胞提供的T7 RNA聚合酶誘導(dǎo)。T7 RNA 聚合酶機(jī)制十分有效并具選擇性：充分誘導(dǎo)時(shí)，幾乎所有的細(xì)胞資源都用于表達(dá)目的蛋白；誘導(dǎo)表達(dá)后僅幾個(gè)小時(shí)，目的蛋白通常可以占到細(xì)胞總蛋白的50%以上。
我公司提供專業(yè)優(yōu)質(zhì)的PET表達(dá)載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)，目標(biāo)對(duì)象包括動(dòng)物（人源細(xì)胞、鼠源細(xì)胞等）、植物（擬南芥、水稻、小麥、玉米等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。公司擁有專業(yè)的儀器設(shè)備和技術(shù)人員支持，周期短，效果好，質(zhì)量?jī)?yōu)，價(jià)格低。
服務(wù)內(nèi)容
服務(wù)說(shuō)明
? 客戶需提供載體、含目的基因的質(zhì)粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標(biāo)蛋白基因序列與酶切位點(diǎn)信息。
?請(qǐng)確認(rèn)待實(shí)驗(yàn)的載體、目的基因片段序列正確，與提供的圖譜等信息匹配，構(gòu)建完成后如需測(cè)序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
? 如果您只提供組織或細(xì)胞樣本，請(qǐng)?zhí)峁┧杩寺』虻腘CBI登錄號(hào)或電子版全序列，并額外收取RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄的費(fèi)用；
? 對(duì)于本公司已有的載體和模板，我們可以免費(fèi)提供。
4、Gateway表達(dá)載體構(gòu)建
Gateway技術(shù)是基于lambda噬菌體的位點(diǎn)特異性重組反應(yīng)，在目的片段兩端添加重組位點(diǎn)，將PCR產(chǎn)物與含重組位點(diǎn)的目的載體混合重組反應(yīng)便可直接轉(zhuǎn)化篩選重組克隆，與經(jīng)典克隆多個(gè)步驟相比，該方法只需一步生化反應(yīng)便能達(dá)到目的，是高通量克隆基因的好方法。Gateway技術(shù)提供以下可能： 通過(guò)去除冗長(zhǎng)的亞克隆步驟節(jié)省您的時(shí)間，同時(shí)將您的基因轉(zhuǎn)移到多個(gè)表達(dá)系統(tǒng) 在任何您選擇的系統(tǒng)――體外，細(xì)菌，酵母，昆蟲，或哺乳動(dòng)物――分析表達(dá)。
我公司提供專業(yè)優(yōu)質(zhì)的Gateway載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)，目標(biāo)對(duì)象包括動(dòng)物（人源細(xì)胞、鼠源細(xì)胞等）、植物（擬南芥、水稻、小麥、玉米等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。公司擁有專業(yè)的儀器設(shè)備和技術(shù)人員支持，周期短，效果好，質(zhì)量?jī)?yōu)，價(jià)格低。
服務(wù)內(nèi)容
服務(wù)說(shuō)明
? 客戶需提供載體、含目的基因的質(zhì)粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標(biāo)蛋白基因序列與酶切位點(diǎn)信息。
? 請(qǐng)確認(rèn)待實(shí)驗(yàn)的載體、目的基因片段序列正確，與提供的圖譜等信息匹配，構(gòu)建完成后如需測(cè)序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
? 如果您只提供組織或細(xì)胞樣本，請(qǐng)?zhí)峁┧杩寺』虻腘CBI登錄號(hào)或電子版全序列，并額外收取RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄的費(fèi)用；
? 對(duì)于本公司已有的載體和模板，我們可以免費(fèi)提供。
5、Crispr/cas9載體構(gòu)建
CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) /Cas (CRISPR-associated) 是最近幾年出現(xiàn)的一種由RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對(duì)靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù)。它是細(xì)菌和古細(xì)菌為應(yīng)對(duì)病毒和質(zhì)粒不斷攻擊而演化來(lái)的獲得性免疫防御機(jī)制。
此系統(tǒng)的工作原理是crRNA (CRISPR-derived RNA) 通過(guò)堿基配對(duì)與 tracrRNA (trans-activating RNA) 結(jié)合形成 tracrRNA/crRNA 復(fù)合物，此復(fù)合物引導(dǎo)核酸酶 Cas9 蛋白在與 crRNA 配對(duì)的序列靶位點(diǎn)處剪切雙鏈 DNA，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)基因組DNA序列進(jìn)行編輯；而通過(guò)人工設(shè)計(jì)這兩種 RNA，可以改造形成具有引導(dǎo)作用的gRNA (guide RNA)，足以引導(dǎo) Cas9 對(duì) DNA 的定點(diǎn)切割。
作為一種 RNA導(dǎo)向的 dsDNA 結(jié)合蛋白，Cas9 效應(yīng)物核酸酶是已知的第一個(gè)統(tǒng)一因子 (unifying factor)，它能夠共定位 RNA、DNA 和蛋白，從而擁有巨大的改造潛力。將蛋白與無(wú)核酸酶的 Cas9(Cas9 nuclease-null)融合，并表達(dá)適當(dāng)?shù)?gRNA，即可靶定任何 dsDNA 序列，而 RNA 可連接到gRNA 的末端，不影響 Cas9 的結(jié)合。因此，Cas9 能在任何 dsDNA 序列處帶來(lái)任何融合蛋白及 RNA，這為生物體的研究和改造帶來(lái)巨大潛力。
我公司提供專業(yè)優(yōu)質(zhì)的crispr/cas9載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)，目標(biāo)對(duì)象包括動(dòng)物（人源細(xì)胞、鼠源細(xì)胞等）、植物（擬南芥、水稻、小麥、玉米等）、微生物（大腸桿菌、放線菌、梭菌等）。可將基因敲入/敲出細(xì)胞系、定點(diǎn)突變，公司擁有專業(yè)的儀器設(shè)備和技術(shù)人員支持，周期短，效果好，質(zhì)量?jī)?yōu)，價(jià)格低。
技術(shù)特色
? 可實(shí)現(xiàn)多個(gè)基因位點(diǎn)及多個(gè)基因同時(shí)敲除；
? 最新的Nickase/雙gRNA技術(shù)，顯著降低脫靶率；
? 無(wú)種屬限制，適用于各種植物的靶向敲除；
服務(wù)說(shuō)明
? 客戶需提供載體、含目的基因的質(zhì)粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標(biāo)蛋白基因序列與酶切位點(diǎn)信息。
? 請(qǐng)確認(rèn)待實(shí)驗(yàn)的載體、目的基因片段序列正確，與提供的圖譜等信息匹配，構(gòu)建完成后如需測(cè)序并且要求序列完全匹配，則需要您提供全序列信息；
? 如果您只提供組織或細(xì)胞樣本，請(qǐng)?zhí)峁┧杩寺』虻腘CBI登錄號(hào)或電子版全序列，本公司將額外收取RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄的費(fèi)用；
參考文獻(xiàn)
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2）BarrangouR,FremauxC,DeveauH,et al.2007 CRISPR provides acquired resistance against viruses in prokaryotes.Science,2007,315(5819):1709-1712.
3）GarneauJE,Dupuis Mè,Villion M,et al.2010 The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA.Nature.468(7320):67-71.
4）Akashi H,Miyagishi M,Taira K. 2004 RNAi expression vectors in plant cells. Methods Mol Biol. 252:533-43.
5）Crowl R,Seamans C,Lomedico P, et al.1985 Versatile expression vectors for high-level synthesis of cloned gene products in Escherichia coli. Gene. 38(1-3):31-8.